软鳍新光唇鱼在孤立环境下17β—雌二醇的分泌行为

摘 要：17-β雌二醇在鱼类性发育过程中具有控制鱼类性别分化和生殖活动的重要作用。该试验通过检测养殖水体，发现当软鳍新光唇鱼（Neolissochilus benasi）进入孤立环境中时，水体中会出现较多的17β-雌二醇，而群居状态下无法检测到足够多的雌二醇。同时这种现象在不同时期也存在差异，繁殖期个体在孤立环境下的雌二醇环境浓度为（3.66±1.08）ng/L，远少于性发育期孤立环境下的个体的雌二醇分泌量（43.52±4.79）ng/L，但两个时期孤立状态下生活7d后的水体中17β-雌二醇含量均有显著下降（P<0.05）。

关键词：17-β雌二醇；软鳍新光唇鱼；性别分化；孤立环境

中图分类号 Q579.1+3；Q17 文献标识码 A 文章编号 1007-7731（2017）15-0126-2

Abstract：During the sexual development process of fish，17β-estradiol plays an important role in controlling the sex differentiation and reproductive activity of fish. In this experiment，by detecting the aquaculture water，it is found that when Neolissochilus benasi enters the isolated environment，more 17β-estradiol will appear in the water，while it cannot detect enough estradiol in a population state. Meanwhile，this phenomenon will be different in different periods. In the breeding season，the individual estradiol concentration in the isolated environment is（3.66±1.08）ng/L，which is much less than that of the sexual development period（43.52±4.79）ng/L； but in the isolated state，the content of 17β-estradiol in water will significantly decrease （P <0.05） after living 7 days in both breeding season and sexual development period.

Key words：17β-estradiol；Neolissochilus benasi；Sex differentiation；Isolated environment

1 引言

軟鳍新光唇鱼（Neolissochilus benasi）是隶属于鲤科（Cyprinidae）鲃亚科（Barbinae）一个种类，旧时称软鳍四须鲃（Barbodesbenasi）[1]。杂食性，一般以水生节肢动物为主，也进食硅藻。分布于元江干支流，李仙江下游及中国与越南交界地区的山溪河流的中底层水域[2]。分布水域水温常年保持在20℃以上，故其属热带暖水性鱼类。性成熟每年一次，3—4月份开始繁殖，4—5月为繁殖盛期。非繁殖季节雌雄第二性征无法分辨，同时性腺始终处于2、3期，在非繁殖季节很难分辨出性别。

性外激素是指动物释放于体外的，能引起同种另一个体产生一种或多种特异性反应的化学物质。在硬骨鱼类中，性激素及其代谢物同时承担着性激素和性外激素2种功能，既作用于自身靶器官，同时也释放到水中作为信号物质影响同类其他个体的生理和行为。鱼类通过嗅电作用感知识别性外激素，在鱼类性腺分化早期，类固醇的受体产生与内生途径的建立之间存在时间差，即在类固醇受体产生时个体还不能自发形成类固醇激素，此时外源性性激素就可以和受体结合发挥作用，从而改变性别分化方向，到性腺分化完全时，又会进一步产生同方向的性激素从而保证其性别的稳定性[3]。根据这个特点，人们通常用雄性激素（如17α-甲基睾酮）和雌性激素（如17β-雌二醇）在幼鱼发育阶段诱导其定向性分化。

17β-雌二醇（estradiol-17β，E2）作为一种天然雌激素现已广泛应用于水产领域，借助E2调控鱼类性别已在多种鱼类上获得成功[4]。针对软鳍新光唇鱼群体在不同养殖环境中保持的特殊雌雄比例，笔者假设其存在種群内的性别控制，尝试对其进行孤立，并检测水中雌二醇的分泌量来判断软鳍新光唇鱼在种群结构变化时内分泌的改变。由于其雌性成年个体体型是同龄雄性的2～3倍，造成软鳍新光唇鱼在养殖过程中成本的浪费，通过本次实验了解软鳍新光唇鱼的性激素分泌特点，为在养殖过程中对其进行进一步的幼龄性别筛选和性别控制做准备。

2 材料与方法

于生殖期前后（3月和6月）分别采文山地区的软鳍新光唇鱼的人工饲养后代，集体暂育1个月后，选取20尾软鳍新光唇鱼放入盛有40L的水箱中进行培养，再另取20尾分别单独放入盛有2L水体的遮光玻璃缸中进行培养，每天使用虹吸管缓慢更换一次水体，每次1L，并在第1天和第7天更换前分别吸取10mL养殖水作为试验样品进行冷冻干燥和β-雌二醇检测。

冷冻干燥时将水体准确称量10mL，加入10mL离心管密封后在-80℃冰箱中放置24h后使用真空冷冻干燥机干燥脱水，完成后在离心管底部加入1mL纯水溶解干物质，而后进行β-雌二醇的Elisa检测，检测使用R&D公司的β-雌二醇Elisa试剂盒。

使用Elisa试剂盒检测样品，以同批次的养殖用水为对照，以标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数（×10），当OD值或浓度计算为负值时计其雌二醇浓度为零。

3 实验结果

从图1可以看出，软鳍新光唇鱼在群体生活时和长期个体单独生长时的雌二醇排泄水平都趋近于零。当其个体初次进入单体环境中时，会出现短暂的雌二醇释放显著升高的情况，但这种反应在生殖期较不明显。

4 讨论

17β-雌二醇是典型的环境雌激素，其对鱼类的性别影响被广泛研究。罗非鱼、斑点叉尾鮰可通过外源17β-雌二醇的变化引起体内雌激素水平的提高[5-6]。在鱼类的性别发育的窗口期，人们还可以通过17β-雌二醇诱导鱼群的雌性化，张晓彦等在对25日龄的半滑舌鳎进行的水浴实验中，最高获得97%的雌性比例[7]，Yamamoto等[8]对雌核发育的牙鲆用17β-雌二醇诱导获得了全雌群体，此外，大西洋庸鲽[9]、黄颡鱼[10]、鲻鱼[11].、施氏鲟[12]也都有通过17β-雌二醇处理获得高雌或全雌种群；另一方面，17β-雌二醇对鱼体的生长发育也有影响，温茹淑等发现在1或10μg/L的17β-雌二醇暴露对雄性唐鱼生长有负面影响[13]。

相对于性外激素效果的研究，近年关于鱼类性外激素分泌的实验较少，只有在吴秋艳等的研究中，发现性成熟雌性中华乌塘鲤会向养殖水中释放由性腺分泌的、相对分子质量为278的组分，但具体结构尚未确定，且其释放条件与本试验无重合[14]。本实验结果显示，在性腺未成熟时，将软鳍新光唇鱼置于单独封闭环境中，会发生17β-雌二醇排泄量的短期激增，但在性腺成熟期没有发现这一现象，说明17β-雌二醇的排泄受环境影响且与软鳍新光唇鱼的性腺发育周期有关，水体中17β-雌二醇短暂增加时浓度低于对其他鱼类产生显著影响的实验浓度，但野外环境中软鳍新光唇鱼的集群特性可能造成鱼群局部雌二醇分布不均衡，因此实验所得的环境雌二醇浓度可能与最终其他鱼体所感受到的浓度有所区别，不排除这种水平的雌二醇浓度会对周围个体造成影响，需要进一步的雌二醇分布实验和对软鳍新光唇鱼的效应实验进行验证。

参考文献

[1]王晓，杨君，陈小勇，等.软鳍新光唇鱼精子的超低温冷冻保存[J].动物学研究，2012，33（3）：283-289.

[2]陈小勇，杨君兴.中国“四须鲃”类的系统整理[J].动物学研究，2003，24（5）：377-386.

[3]De-shou W，Zong-xiu J.鱼类性外激素的研究进展[J].水生生物学报，2000，24（3）：282-288.

[4]Yamazaki F. Sex control and manipulation in fish[J].Aquaculture，1983，33（1-4）：329-354.

[5]陈家长，王泽镕，瞿建宏，等.17β-雌二醇与1-萘酚对雄性罗非鱼（GIFT Oreochromis niloticus）雌激素效应的比较[J].生态环境学报，2012，21（4）：754-759.

[6]Tilton F，Benson W H，Schlenk D. Elevation of serum 17-β-estradiol in channel catfish following injection of 17-β-estradiol，ethynyl estradiol，estrone，estriol and estradiol-17-β-glucuronide[J].Environmental toxicology and pharmacology，2001，9（4）：169-172.

[7]张晓彦，刘海金.17β-雌二醇对半滑舌鳎性分化和生长的影响[J].东北农业大学学报.2009，（6）：67-72.

[8]Yamamoto E. Application of gynogenesis and triploidy in hirame（Paralichthys olivaceus）breeding[J]. Fish Genet. Breed. Sci，1992，18： 13-23.

[9]Hendry C I，Martin-Robichaud D J，Benfey T J. Hormonal sex reversal of Atlantic halibut （Hippoglossus hippoglossus L.）[J].Aquaculture，2003，219（1）：769-781.

[10]Park I S，Kim J H，Cho S H，et al. Sex differentiation and hormonal sex reversal in the bagrid catfish Pseudobagrus fulvidraco[J].Aquaculture，2004，232（1）： 183-193.

[11]方永強，翁幼竹，林君卓，等.全雌鯔鱼培育的研究[J].水产学报，2001，25（2）： 131-135.

[12]高艳丽，华育平，曲秋芝，等.17β-雌二醇诱导施氏鲟全雌化后在鱼体内残留的研究[J].黑龙江畜牧兽医，2006 （5）： 86-87.

[13]温茹淑，方展强，陈伟庭.17β-雌二醇对雄性唐鱼卵黄蛋白原的诱导及性腺发育的影响[J].动物学研究，2008，29（1）： 43-48.

[14]吴秋艳.中华乌塘鳢性信息素的研究[D].厦门：厦门大学，2011.

（责编：张宏民）

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