滇池高背鲫人工繁殖与胚胎发育观察研究

材料与方法

1.1 亲鱼来源

试验用鱼来自于云南省水产技术推广站基地，为云南高背鲫原种场保种的亲本。

1.2 亲鱼培育

2016年12月，从云南高背鲫原种场3#保种池塘（面积0.8hm2）挑选体重200～300 g、腹部较膨大的滇池高背鲫，置于7-1#（面积300 m2）流水池单独培育，投喂粗蛋白含量33%的鲤鱼鱼苗料，加强日常管理和定期流水刺激。

1.3 亲鱼选择

选择腹部膨大柔软的滇池高背鲫作为母本。雄鱼从原种场人工养殖的云南光唇鱼和短须裂腹鱼中挑选，体重100～180 g/尾，可以人工挤出精液。

1.4 人工催产与授精

2017年3月7日和10日进行2次人工催产，雌鱼采用500 IU/kg鱼体重的HCG一次性注射，雄鱼不注射。平均水温14 ℃，15～18 h后进行人工授精。受精卵置于塑料大棚中孵化，用于胚胎发育观察的受精卵置于载玻片上。

1.5 胚胎观察

每次取受精卵20～30枚，采用Olympus SZ61体视解剖镜和上海测维光电技术有限公司生产的LW100T生物显微镜进行观察，胚胎发育图片采集使用Nikon D50相机，图片制作排版使用Photoshop cs6；胚胎发育按50%受精卵发育至同一时期开始计时。

2 结果与分析

2.1 人工催产情况

3月7日催产滇池高背鲫20尾，雄鱼选择短须裂腹鱼；3月10日催产10尾，雄鱼选择短须裂腹鱼。雌雄比均为1：1，共获得受精卵约14.3万枚。催产率93%，受精率（以发育至原肠中期计）均达81%以上，孵化率77%以上，人工繁殖情况详见表1。

2.2 胚胎发育情况

滇池高背鲫受精卵胚胎发育过程可分为胚盘隆起期、细胞分裂期、囊胚期、原肠期、神经胚期、胚孔封闭期、肌节出现期、眼囊期、尾芽期、尾泡期等16个阶段，包括23个时序。各阶段发育时序见表2，各阶段发育图谱见图1。

2.2.1 胚盘隆起。滇池高背鲫成熟受精卵为圆形沉性卵，胚体呈青绿色，卵子直径1.5 mm，遇水后具有强黏性。受精10 min吸水膨胀至最大，卵径平均1.8 mm，见图1（1）。受精27 min后胚盘形成，见图1（2）。

2.2.2 细胞分裂期。受精48 min，胚盘上开始形成一卵裂沟，细胞开始分裂，进入二细胞期，见图1（3）；71 min进入四细胞期，见图1（4）。随着细胞团不断分裂，细胞体积逐渐变小，细胞数目不断增多，约243 min进入多细胞期，见图1（5）。

2.2.3 囊胚期。随着细胞分裂和细胞团的隆起，囊胚层在卵黄上形成1个半球状隆起，815 min到达囊胚早期，见图1（6）。之后细胞下移，囊胚层高度逐渐降低，进入囊胚中期，见图1（7），时间为1 100 min。受精1 358 min，囊胚细胞向边缘扩展、下包，囊胚层变为扁平状，进入囊胚晚期，见图1（8）。

2.2.4 原肠期。受精1 630 min，囊胚层下包至卵黄囊1/2位置，胚环出现，进入原肠早期见图1（9），受精1 911 min，囊胚层下包卵黄囊2/3，在囊胚边沿的上沿一环形区域内细胞分裂加速，形成一增厚层，即胚环，而胚环上突出、加厚的部分为胚盾，进入原肠中期，见图1（10）。受精2 220 min，胚环下包至卵黄囊3/4位置，进入原肠晚期，见图1（11）。

2.2.5 神经胚期。受精2 428 min，胚盘几乎包裹整个卵黄囊，未包入部分的卵黄为卵黄栓，进入神经胚期，见图1（12）。

2.2.6 胚孔封闭期。受精2 452 min，卵黄栓消失，胚盘完全包住卵黄，进入胚孔封闭期，见图1（13）。

2.2.7 肌节出现期。3 371 min，胚体可见2～3对肌节，进入肌节出现期，见图1（14）。

2.2.8 眼囊期。3 969 min，眼基呈椭圆形，肌节9对，进入眼囊期，见图1（15）。

2.2.9 尾芽期。4 595 min，尾芽前端开始从卵黄囊上分离，称为尾芽期，见图1（16）。

2.2.10 尾泡期。受精4 695 min，尾部出现一空泡，卵黄囊略成梨型，胚体尾部呈梨型，为尾泡期，见图1（17）。

2.2.11 眼晶体形成期。4 983 min，卵黄囊开始收缩，呈倒梨型，为眼晶体形成期，见图1（18）。

2.2.12 肌肉效应期。5 185 min，胚体微弱扭动，进入肌肉效应期，见图1（19）。

2.2.13 心脏搏动期。受精6 016 min，胚体头部下方、卵黄囊前端出现一搏动小管，心率29～31次/min，进入心脏搏动期，见图1（20）。眼部黑色素开始形成。

2.2.14 胸鳍原基期。6 562 min，眼部黑色素进一步沉着，目视下可见1对黑色眼点，此时胸鳍原基出现、心脏增大，进入胸鳍原基期，见图1（21）。

2.2.15 眼黑期。7 500 min，胚体各部开始出现黑色素，尾部进一步从卵黄囊上分离，且可自由伸达至头部，裸视情况下眼睛明显，心脏处可见血液流动，略呈淡红色，心率40～42次/min，进入眼黑期，见图1（22）。

2.2.16 出膜期。胚体尾部不断扭动并与头部同时用力，尾部先于头部伸出卵膜，随后在胚体扭动下出膜，进入出膜期初孵仔鱼，见图1（23），心率42～46次/min，时间为10 493 min。初孵仔鱼平均全长6.1 mm，体黑色素明显，尤以背部和尾部较多，初孵仔鱼沉入池底，静待器官的进一步发育。

3 结论与讨论

3.1 滇池高背鲫雌核发育特点

滇池高背鯽属自然形成的一个特殊三倍体鲫鱼种群，为滇池水系特有种。其在自然条件下依靠麦穗鱼、鲤鱼等鱼类的雄鱼精子刺激卵子发育，精子的细胞核并未参与卵球的发育，胚胎的发育仅在母体遗传的控制下进行[5]。本试验采用云南光唇鱼和短须裂腹鱼雄鱼刺激滇池高背鲫卵子，获得较高的受精率和出膜率。雌核发育的滇池高背鲫因其只继承母体特性，遗传性高、抗逆性强，在养殖条件下也能够较好地保证其种质纯度，且在单一数量情况下可以迅速补充群体数量。通过试验观察，云南光唇鱼和短须裂腹鱼雄鱼在3月初即达到性成熟，与滇池高背鲫性腺发育同步，且雄鱼精液充足，无需人工催产，是滇池高背鲫人工繁殖良好的选择品种。

3.2 繁殖生物学特性

在昆明地区，滇池高背鲫性成熟时间为3月上旬。本试验中，3月2日即观察到池塘中部分鲫鱼排卵，3月15日检查已全部排卵。受精卵在水温12.9～15.0 ℃条件下，经10 493 min即可孵出仔鱼，仔鱼平均全长6.1 mm，与李映伶等[6]报道的滇池高背鲫孵化时间接近。

3.3 胚胎发育特点

滇池高背鲫卵子直径为1.5 mm，吸水膨胀后卵子直径可达1.8 mm，卵周隙较小。鲫属鱼类受精卵卵径大多为1.2～2.0 mm，滇池高背鲫受精卵比彩鲫受精卵（2.0 mm）略小，与普安鲫卵径（1.88 mm）相近，较以异源四倍体鲫鲤为父本、二倍体金鱼为母本杂交形成的三倍体鲫鱼卵径（1.3～1.4 mm）略大[6-10]。

滇池高背鲫受精卵卵膜较软，黏性强，显微镜下观察，软膜表面有透明胶状体，可能是滇池高背鲫受精卵黏性强的原因。由于滇池高背鲫受精卵黏性强和卵膜软薄的特点，黏附的受精卵在观察时翻动困难，容易破碎，观察角度局限，加之四细胞后期细胞分裂大小不均等，细胞分裂期观察效果不佳。

4 参考文献

[1] 褚新洛，陈银瑞.云南鱼类志（上册）[M].北京：科学出版社，1989：350-353.

[2] 催悦礼，昝瑞光.滇池高背型鲫鱼雌核发育的研究[J].动物学研究，1982（3）：237-243.

[3] 严晖，杨雄.滇池高背鲫繁殖技术[J].淡水渔业，2000，30（7）：6-7.

[4] 黄生民，秦长庚，潘淑英，等.滇池高背鲫和方正银鲫酯酶、乳酸脱氢酶同工酶的比较研究[J].动物学研究，1988，9（1）：69-78.

[5] 白小宁，熊燕.彩鲫的仔鱼发育观测试验[J].黑龙江水产，2014（6）：18-22.

[6] 李映伶，张文魁，杨礼.滇池高背鲫人工繁殖技术[J].现代农业科技，2011（20）：323-324.

[7] 赵俊，董成稳，罗红苑，等.复合四倍体彭泽鲫胚胎发育的研究[J].暨南大学学报，2011，32（1）：94-99.

[8] 梁正其，马珊，姚俊杰，等.普安银鲫胚胎发育的初步研究[J].水产科学，2012，31（6）：316-340.

[9] 易念，张纯，王云，等.三倍体鲫鱼早期胚胎发育观察[J].湖南师范大学自然科学学报，2006，29（1）：87-92.

[10] 常剑波，王剑伟，曹文宣.稀有鮈鲫胚胎发育研究[J].水生生物学报，1995，19（2）：97-104.

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