颅内出血新生儿血清TNF-α与IL-1β的临床价值研究

对照组。分别于出生后24 h内及出生后3、7 d，取外周静脉血液标本，采用双抗体夹心酶联免疫测定法检测血浆IL-1β、TNF-α水平。随访患儿1年，统计预后情况。 结果 颅内出血组新生儿血浆IL-1β、TNF-α水平均明显高于对照组（P < 0.05）。同时，出生后患儿血浆IL-1β、TNF-α水平随着时间逐渐下降（P < 0.05）。同出血量患儿在出生后24 h内，血浆IL-1β、TNF-α差异有统计学意义（P < 0.05）。其中出血量为大量的患儿，血浆IL-1β、TNF-α水平最高。颅内出血新生儿出血量与血浆IL-1β、TNF-α水平均呈正相关（r = 0.409、0.376，P < 0.05）。治愈组血浆IL-1β、TNF-α水平均显著低于未愈组，差异有统计学意义（P < 0.05）。 结论 IL-1β和TNF-α在颅内出血新生儿血浆中表达异常升高，且与血肿量呈正相关。颅内出血新生儿预后与血浆IL-1β和TNF-α密切相关，预后差的患儿血浆IL-1β和TNF-α显著升高。

[关键词] 颅内出血;新生儿;TNF-α;IL-1β

[中图分类号] R722.1          [文献标识码] A          [文章编号] 1673-7210（2019）05（b）-0063-04

[Abstract] Objective To investigate the clinical value of serum TNF-α and IL-1β in neonates with intracranial hemorrhage. Methods From January 2015 to January 2017， 98 neonates with intracranial hemorrhage in Tianmen First People′s Hospital were selected as the subjects （intracranial hemorrhage group）， and 50 healthy newborns at the same time were selected as the control group. The levels TNF-α and IL-1β in plasma were detected by ELISA assay at 24 h， 3， 7 d after birth respectively. The patients were followed up for 1 year， and the prognosis was statistically analyzed. Results The levels of plasma TNF-α and IL-1β in intracranial hemorrhage group were significantly higher than those in control group （P < 0.05）. At the same time， plasma TNF-α and IL-1β levels gradually decreased after birth （P < 0.05）. There was a significant difference in plasma TNF-α and IL-1β in neonates with bleeding volume in 24 h （P < 0.05）. The neonates with highest blood volume had the highest plasma TNF-α and IL-1β levels （P < 0.05）. There was a positive correlation between the amount of bleeding and the levels of TNF-α and IL-1β in neonates with intracranial hemorrhage （r = 0.409， 0.376; P < 0.05）. The plasma TNF-α and IL-1β levels in the cure group were significantly lower than those in the unhealed group （P < 0.05）. Conclusion The expression of TNF-α and IL-1β in plasma of neonates with intracranial hemorrhage increased abnormally， and positively correlated with the amount of hematoma. The prognosis of neonates with intracranial hemorrhage is closely related to plasma TNF-α and IL-1β， plasma IL-1β and TNF-α are significantly increased in neonateswith poor prognosis.

[Key words] Intracranial hemorrhage; Newborn; TNF-α; IL-1β

新生儿颅内出血（intractanial hemorrhage）是常見的新生儿因产伤或缺氧引起的脑损伤，具有致残率及致死率高的特点，部分幸存新生儿可遗留严重的神经系统后遗症，如脑积水、癫痫及运动障碍等[1]。新生儿颅内出血包括硬膜下出血、原发性蛛网膜下隙出血、生发基质-脑室内出血、小脑出血和脑实质出血等多种类型，尤其是在早产儿中多见，是造成其死亡的主要原因之一[2]。颅内出血发生除可因原发性的出血导致的占位效应所致原发性颅脑损伤外，还可通过激活继发性免疫反应，释放大量的炎症因子导致继发性脑损伤。成人颅内出血的研究表明，血清白细胞介素-1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平在损伤后显著升高，且与损伤程度密切相关[3]。但是，目前关于颅内出血新生儿血清IL-1β、TNF-α的临床价值仍鲜见报道。本研究通过观察98例颅内出血新生儿血清IL-1β、TNF-α的动态变化，并与健康新生儿对照，探讨颅内出血新生儿血清IL-1β、TNF-α的临床价值。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择2015年1月～2017年1月天门市第一人民医院住院治疗的新生儿颅内出血患儿98例为研究对象，设为颅内出血组，诊断标准依据第4版《实用新生儿学》[4]。98例颅内出血新生儿中，男51例，女47例;胎龄34～42周，平均（37.89±4.63）周;出生体质量2354～3721 g，平均（3157±952）g;确诊为颅内出血时间，出生后2～24 h，平均（11.46±7.35）h。根据出血部位区分，其中蛛网膜下腔出血47例，脑实质出血25例，硬膜下出血9例，脑室内出血17例。按出血量分为小量（<15 mL）32例，中量（15～30 mL）27例，大量（>30 mL）39例。血肿体积计算方法按多田公式计算。同时纳入同期出生的健康新生儿50名为对照组，男27名，女23名;胎龄34～42周，平均（38.74±2.15）周;出生体质量3152～4138 g，平均（3967±1307）g。两组新生儿性别、胎龄、出生体质量等一般资料比较，差异无统计学意义（P > 0.05），具有可比性。研究对象排除标准：①合并妊娠期糖尿病、子痫前期等妊娠合并症者;②出生时或出生后合并感染者;③伴心、肝、肾或其他系统疾病，或合并造血系统及自身免疫性疾病者;④呼吸窘迫综合征、重度窒息及新生儿缺氧缺血性脑病者;⑤出生后1个月内死亡、转院或自行出院者。本研究经医院医学伦理委员会批准，两组研究对象家属和/或监护人对研究内容知情，自愿参与并签署知情同意书。

1.2 方法

两组新生儿均于出生后24 h内及出生后3、7 d，分别抽取5 mL外周静脉血液标本。采用双抗体夹心酶联免疫测定法，检测新生儿的IL-1β、TNF-α血清细胞因子水平。获得血液标本后，4℃ 10 000 r/min（离心半径=40 cm）离心1 min获得血清，保存于-80℃冰箱中待测。IL-1β、TNF-α血清细胞因子检测试剂盒购自武汉博士德生物试剂工程公司，具体操作严格按照说明书执行。

1.3 治疗方法

对颅内出血新生儿组采取综合对症治疗以及个体化治疗。患儿均于明确诊断后立即给予治疗，具体方法包括止血、降低颅内压、抗惊厥及营养脑细胞等，必要时可于病情稳定后采取高压氧治疗。

1.4 疗效判断标准

随访1年，依据患儿具体情况，将其预后分为治愈与未愈2种情况。治愈：治疗后复查CT提示颅内出血灶消失，临床症状及体征全部消失[5]。未愈包括3种情况：①治疗后CT提示颅内出血灶消失或减小，但仍存在神经系统症状及体征;②颅内高压症状无明显改善甚至加重;③死亡[6]。

1.5 统计学方法

采用统计软件SPSS 15.0对数据进行分析，正态分布的计量资料以均数±标准差（x±s）表示，两组间比较采用t检验;重复测量的计量资料、多组间比较采用方差分析，两两比较采用Q检验。计数资料以率表示，采用χ2检验。以P < 0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组血浆IL-1β、TNF-α水平比较

颅内出血组新生儿血浆IL-1β、TNF-α水平均明显高于对照组，差异有统计学意义（P < 0.05）。同时，出生后患儿血浆IL-1β、TNF-α水平随着时间逐渐下降（P < 0.05）。见表1～2。

2.2颅内出血组不同出血量与不同出血部位患儿血浆IL-1β、TNF-α水平比较

不同出血部位患儿血浆IL-1β、TNF-α水平差异无统计学意义（P > 0.05）。不同出血量患儿在出生后24 h内，血浆IL-1β、TNF-α水平差异有统计学意义（P < 0.05），其中出血量为大量的患儿，血浆IL-1β、TNF-α水平最高。见表3。

2.3 出血量与血浆IL-1β、TNF-α水平相关性分析

相关性分析结果示，颅内出血新生儿出血量与血浆IL-1β、TNF-α水平均呈正相关（r = 0.409、0.376，P = 0.009、0.012）。

2.4颅内出血组不同预后患儿血浆IL-1β、TNF-α水平比较

比较出生7 d时不同预后患儿血浆IL-1β、TNF-α水平。98例患儿中，治愈65例，未愈33例，其中死亡2例。治愈组血浆IL-1β、TNF-α水平均显著低于未愈组，差异有统计学意义（P < 0.05）。见表4。

3 讨论

新生儿颅内出血是新生儿常见的神经系统疾病，产伤、窒息、缺氧是其常见病因。严重的新生儿颅内出血甚至可导致脑干功能受损、出血后脑积水，以及其他并发症，常易遗留有不同程度后遗症。颅内出血病理生理机制不仅包括出血对脑组织的压迫、破坏以及血肿占位效应导致的原发性颅脑损伤，出血后细胞因子的毒性作用亦造成了继发性脑损伤，且继发性颅脑损伤是影响患者预后的关键[7]。颅内出血后患儿在应激状态下出现血清免疫细胞（如单核巨噬细胞、T细胞、B细胞、NK细胞）和某些非免疫细胞（如血管内皮细胞、神经母细胞等）激活，合成分泌具有高度生物学活性的炎性因子，在介导和调节炎症中发挥重要作用，亦是导致继发性颅脑损伤的重要机制[8]。成人脑出血的研究表明，多种细胞因子均异常表达，且与神经损伤程度及出血量密切相关，尤其是IL-1β、IL-6和TNF-α等炎性细胞因子发挥极为重要的作用[9]。

IL-1β是炎性反应中的一个共同因子，具有多重調节功能，发挥重要的神经体液调节作用，调节T和B淋巴细胞增殖和分化，刺激造血细胞，参与炎性反应[10]。正常生理情况下，IL-1β水平较低，当机体出现肿瘤、炎性反应、自身免疫性疾病等应激反应时，其血浆含量急剧升高，且与疾病状态密切相关[11]。研究表明，成人脑出血后IL-1β的显著升高是出血后中枢神经系统炎性反应的重要标志，与损伤程度呈正相关[12]。脑出血后IL-1β可以通过多种机制加重继发性颅脑损伤，包括刺激花生四烯酸的代谢使自由基和一氧化氮的合成、释放增多，产生神经毒性;促进黏附分子的表达参与炎性反应;激活胶质细胞释放IL-6等其他炎性细胞因子[13-15]。研究发现，IL-1β可以促进中枢神经系统胶质细胞释放合成分泌IL-6，进而导致内皮细胞损伤，增加血脑屏障通透性，加重脑水肿及神经细胞凋亡[16]。因此，IL-1β在颅内出血中发挥核心作用，通过多种机制影响神经损伤的发生发展[17]。本研究发现，新生儿颅内出血后血浆IL-1β显著升高，且与出血量密切相关，但是与出血部位无明显相关性。同时，IL-1β亦与预后密切相关，患儿预后较差组，其血浆IL-1β水平明显高于治愈组。这提示IL-1β可以作为判断新生儿颅内出血预后的重要指标，但其临床应用还有待进一步探讨。

另一种重要的炎症因子TNF-α，是与IL-1β类似，由活化单核-巨噬细胞产生的活性蛋白，亦可由中枢神经系统活化小胶质细胞、星形胶质细胞、血管内皮细胞，甚至某些部位的神经合成分泌[18-19]。TNF-α过度释放，除通过促进与IL-1β相似的IL-6等炎症因子释放，介导继发性颅脑损伤外，还可通过诱导基质金属蛋白酶分泌，启动促进包括血管内皮细胞基底膜在内的细胞外基质分解，破坏血脑屏障，诱发血管源性脑水肿[20]。TNF-α可以通过直接调控神经元、胶质细胞的细胞坏死，以及新血管形成等多种机制促进继发性颅脑损伤的发生发展[21-22]。成人脑出血的研究已表明，TNF-α的表达明显增加，且在循环中的表达亦明显上调，可以作为监测患者脑出血疾病严重状态的重要指标。生理情况下，TNF-α可以通过调控细胞增殖与循环免疫平衡，发挥保护作用，而疾病状态下，TNF-α异常升高，且与颅内出血的量密切相关。同时，患儿预后较差组血浆TNF-α水平明显高于治愈组，提示TNF-α可以作为判断新生儿颅内出血预后的重要指标，但其进一步临床应用还有待进一步探讨。

综上所述，IL-1β和TNF-α在颅内出血新生儿血浆中表达异常升高，且与血肿量呈正相关。颅内出血新生儿预后与血浆IL-1β和TNF-α密切相关，预后差的患儿血浆IL-1β和TNF-α显著升高。

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（收稿日期：2018-08-29  本文编辑：苏  畅）

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