山茶黑斑病的生物学特性研究及毒力测定

材料与方法

1.1 试验材料

1.1.1 供试病原菌 山茶黑斑病菌叶枯链格孢（A. alternate）分离自合肥市逍遥津公园山茶上采取的新鲜病叶，经室内组织分离、纯化，获得纯菌株。病原菌于PDA培养基上培养5 d后，用于后续试验研究。

1.1.2 供试药剂 35%戊唑·福美双悬浮剂（南京南农农药科技发展有限公司），50%多菌灵超微可湿性粉剂（四川国光农化股份有限公司），43%戊唑醇悬浮剂（青岛奥迪斯生物科技有限公司）。

1.2 生物学特性研究

1.2.1 不同培养基对菌落生长的影响 将直径5 mm的病菌菌丝块接种于20%山茶叶片煎汁琼脂培养基、PDA和OA培养基上25℃培养，6 d后测量菌落直径。

1.2.2 不同温度对菌落生长的影响 将直径5 mm的病菌菌丝块接种于PDA平板中央，然后分别在5、10、15、20、25、30、35、40℃恒温培养，6 d后测量菌落直径。

1.2.3 不同pH对菌落生长的影响 用稀HCl和NaOH溶液制成pH分别为3、4、5、6、7、8、9的PDA平板，将直径5 mm的病菌菌丝块接种其平板中央，并于25℃恒温培养，6 d后测量菌落直径。

1.2.4 不同光照对菌丝生长的影响 将直径5 mm的病菌菌丝块接种于PDA平板中央，置于全光照、全黑、自然光3个光照处理下，于25℃恒温培养，6 d后测量菌落直径。

1.3 药剂毒力测定

采用生长速率法测定药剂毒力。将供试药剂用灭菌水配制成母液后，按比例配制每种药剂的7个浓度梯度PDA平板，并以不添加药液的PDA平板为空白对照。于25℃恒温箱中培养6 d，测量菌落直径，计算抑制率，以药剂有效成分的浓度为测试浓度计算回归方程和抑制中浓度EC50。

2 结果与分析

2.1 病害症状、病原及病原菌培养性状观察

山茶黑斑病多始于叶缘或叶尖，初期病斑为褐色，后向内扩展成不规则黑褐色大病斑，病斑边缘深褐色，常造成半叶至全叶枯死，后期病斑呈灰白色，且病斑上可见成簇或散生的黑色霉层（图1a）。根据显微检查，引起山茶叶斑病的病原为半知菌亚门丝孢目链格孢属真菌——叶枯链格孢（A. alternate）。

在PDA培养基上培养初期，菌落圆形，白色，随着菌落生长，菌落出现不明显的同心轮纹，中间大部分为浅灰黑色，边缘白色（图1b）。分生孢子梗淡褐色，分生孢子橢圆形、卵形，淡褐色，有喙，具纵横隔膜（图1c）。

2.2 不同培养基对病菌生长速率的影响

山茶黑斑病菌在20%山茶叶片煎汁琼脂培养基、PDA和OA培养基上均能生长，但在PDA培养基上生长最快，培养6 d后菌落直径达8.2 cm，其次为OA培养基，培养6 d后菌落直径为7.8 cm，而在山茶叶片煎汁琼脂培养基上菌落生长速度最慢，培养6 d菌落直径6.1 cm，这表明该病菌生长需大量碳源，是一种兼性腐生菌。

2.3 不同温度对菌丝生长的影响

山茶黑斑病菌在温度为5～35℃时均能生长，其中在25℃时菌落生长最快，当温度大于30℃，菌丝生长趋势明显下降，温度达40℃时菌落不能生长，甚至菌丝出现衰亡现象（图2）。

2.4 不同pH对菌丝生长的影响

山茶黑斑病菌对酸碱度的适应范围比较广，pH 3～9均可生长，在pH 5～7时生长最快，在第6 d时，pH 6菌落直径达8.57 cm（表1）。pH过高或过低时，菌落生长速度均较慢，表明病原菌喜中性偏酸的环境，过酸或过碱的环境均不适于该病菌生长。

2.5 不同光照对菌丝生长的影响

山茶黑斑病菌在全光、全黑或光暗交替处理下菌落生长速度大体一致，培养6 d后菌落直径分别为8.45、8.23、8.13 cm，表明光照对菌落生长影响不大。

2.6 室内抑菌效果测定

3种杀菌剂对山茶黑斑病菌的毒力存在明显差异，其中以43%戊唑醇悬浮剂毒力最高，其EC50为0.009 μg/ml，其次为35%戊唑·福美双悬浮剂， 50%多菌灵超微可湿性粉剂毒力最低，EC50为0.723 μg/ml（表2）。

3 结论与讨论

通过症状观察、显微鉴定，明确了山茶黑斑病在叶片上的危害症状，这为生产上直接诊断提供了参考依据。山茶黑斑病菌在20%山茶叶片煎汁琼脂培养基、PDA和OA培养基上均能生长，其中以碳源最丰富的PDA培养基最适宜菌落生长，病菌生长所需养分以碳源为主，病菌可能为兼性寄生菌。该菌在5～35℃、pH 3～9均可生长，尤其适宜25～30℃和pH 6的酸性环境，菌丝的致死温度为40℃，菌落生长对光照的要求不严格。

戊唑醇是一种高效、广谱、内吸性杀菌剂，兼具保护、治疗、铲除功能，具有药效强、植物吸收快、持续时间长等优点，已在农业和果蔬生产中得到广泛应用。目前，植物病原菌对传统农药产生抗性已多有报道，因此在园林植物病害防治过程中，应控制传统农药的使用次数和使用量。当前新农药层出不穷，这为生产中农药的使用提供了更多选择。该文通过与传统杀菌剂多菌灵毒力测定的比较，发现戊唑醇和戊唑·福美双室内杀菌效果更好，说明新药剂在生产中有广阔的应用前景。为了加快新农药在园林植物生产和养护上的使用和推广，今后应对园林植物病害进行新药剂室内、林间使用试验研究。

山茶系半阴性树种，喜半阴、忌烈日，在土层深厚、有机质丰富的疏阴湿润地或沟谷两侧生长良好。因此，在园林植物搭配中，要注意山茶有一定的遮阳效果。施用有机肥改善土壤环境，合理修剪，通风透光良好，提高树势，结合使用各种高效、环保药剂，可有效控制山茶各类病害的发生。

参考文献

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[2] 曾静，朱学栋，朱菲菲.山茶花的生态特性及其化学研究进展[J].重庆市渝东南农业科学院，2014，27（5）：53-54.

[3] 王建伟，钱显明，张炳欣.浙江省山茶花病害[J].植物病理学报，1990，20（2）：89-92.

[4] 何美仙，黄飞来，刘忠良.山茶叶部主要病害的发生与防治[J].现代农业科技，2017（24）：110-111.

责任编辑：郑丹丹

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