桃蚜对噻虫嗪代谢抗性机制研究

材料与方法

1.1供试虫源

敏感品系：桃蚜（Myzus persicae）敏感品系于2006年10月采自湖南郴州市安仁县熊蜂山自然保护区一野生桃树上，该区域为自然保护区，方圆10 km内从未使用过化学农药。室内使用自种萝卜苗继代饲养桃蚜（光照培养箱设定温度为（25±1）℃，光周期L∥D= 16 h∥8 h，相对湿度70%～80%），作为噻虫嗪相对敏感品系（THIS）。

抗性品系：将采回的相对敏感品系用25%噻虫嗪水分散粒剂汰选得到。根据毒力测定结果，用25%噻虫嗪水分散粒剂配制好LC70浓度的药液置于烧杯中，烧杯中放入适量棉花，将萝卜苗茎浸入上述烧杯中24 h后饲养桃蚜，饲养1 d后将存活桃蚜用毛笔挑至新种萝卜苗上饲养，采用此方法进行继代饲养和汰选，每次处理浓度控制在杀死70%左右成蚜，根据生测结果适当提高用药浓度，每代进行一次毒力测定。以几率值法计算毒力方程，LC50及95%置信区间。经过对桃蚜相对敏感品系15代汰选后得到桃蚜相对抗性品系（THIR）。

1.2主要试剂及仪器

1.2.1供试药剂

98%噻虫嗪（thiamethoxam）原药（瑞士先正达作物保护有限公司），用于生物测定试验；25%噻虫嗪水分散粒剂（瑞士先正达作物保护有限公司），用于抗性筛选。

1.2.2主要试剂

乙酸α萘酯、乙酸β萘酯、对α萘酚、还原型L谷胱甘肽（GSH）、对硝基苯和NADPH均为Sigma公司产品；硝基苯酚（NO2C6H4OH），上海三爱思试剂有限公司；对硝基磷酸二钠（C6H4NNa2O6P · 6H2O），Merck公司；还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADPH），北京鼎国生物技术有限公司；对硝基苯甲醚（C7H7NO3），上海三爱思试剂有限公司；牛血清白蛋白Albumin，上海伯奥生物科技有限公司；考马斯亮蓝G250，Fluka公司。本试验提取和酶学测定部分所用试剂为分析纯试剂。

1.2.3主要仪器

UV2201型紫外分光光度计，日本岛津公司，Beckman低温离心机，德国贝克曼公司。

1.3萝卜苗种植方法

将萝卜种子浸泡水中5 h后再使用75%百菌清500倍液浸泡0.5 h，种子用清水冲洗干净后均匀种植在未含农药的湿润土壤中，置于光照培养箱中，培养温度为（25±1）℃，相对湿度55%，光周期L∥D=16 h∥8 h，每3～5 d种植一批萝卜苗。

1.4生物测定方法

采用叶柄内吸法，将花椰菜（Brassica oleracea var. botrytis Linn.）叶剪下后立即将叶柄浸入系列浓度药液（0.25、0.5、1、2、4、8、16、32、64、128 mg/L） 中， 24 h后将带药叶片剪取d=5.5 cm 的圆片，先向培养皿中倒入12 g/L 的琼脂3～5 mm 用以保湿，待琼脂冷却后将叶片放置在d=6 cm的培养皿内，每个培养皿中放入30头大小一致的桃蚜，用保鲜膜将培养皿封口，封口膜上针扎20～30个小孔，所有培养皿放入人工气候箱内饲养，饲养1 d后观察结果，毛笔轻触桃蚜，不动者视为死亡。每个处理设置4次重复。用DPS V12.01求出毒力回归方程、标准误、LC50及其置信区间。

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