太原市郊区黄瓜霜霉病菌对甲霜灵的抗药性检测

摘要：对太原市郊区黄瓜主要种植区黄瓜霜霉病菌对甲霜灵的抗药性进行了检测，结果表明：来自于8个不同地区的黄瓜霜霉病菌对甲霜灵的抗性频率均为100％。在检测的27个菌株中有2个中抗菌株，12个高抗菌株，13个特高抗菌株，无敏感菌株。

关键词：黄瓜霜霉病菌；甲霜灵；抗药性

中图分类号：S 436．421．11

自20世纪90年代以来，太原市政府将蔬菜产业作为农业发展的重中之重，黄瓜作为保护地主要种植品种而被大面积栽培。近年来黄瓜霜霉病发生日趋严重Ⅲ，严重影响了黄瓜的生产。黄瓜霜霉病是由古巴假霜霉菌[Pseudoperonospora cubensis (Berk etcert)Rostr.]引起的一种毁灭性病害，流行速度相当快，当条件适合病情发展时，从发病中心病株开始15d左右，便可造成全棚黄瓜死亡。目前太原市近远郊黄瓜霜霉病的防治仍以化学防治为主，其中含有甲霜灵(metalaxyl)成分的药剂在市场上占有较大比重。甲霜灵属苯基酰胺类杀菌剂，具有很强的保护和治疗作用。对苯基酰胺类杀菌剂的抗性，是植物病原菌抗药性突出的问题之一。这类内吸性杀菌剂属于特异性位点抑制剂(site-specific inhbitor)，对病菌作用位点单一，只对病菌的单一代谢环节起作用，一旦此位点发生突变，药剂即不能与其产生作用，因而容易导致病菌产生抗药性。同时，该类药剂之间存在交互抗性，抗性水平普遍较高，能稳定遗传。本试验拟选择太原市近远郊黄瓜种植区，采集分离黄瓜霜霉病菌株，利用叶盘漂浮法对黄瓜霜霉病菌进行抗药性检测。

1　材料与方法

1.1　供试材料

1.1.1　供试菌株

按照随机取样的原则在太原市近远郊采集各主要种植区黄瓜病叶，分离霜霉病菌株，以采样地名大写拼音头十序号编号。

1.1.2　供试药剂

91％甲霜灵原药由浙江一帆化工有限公司提供。

1.1.3　供试植物

高感霜霉病的黄瓜品种为新泰密刺，待植株长至7～8片叶时取健康叶片供试。

1.2　试验方法

1.2.1　供试药剂的配制

甲霜灵原药以丙酮为溶剂，用蒸馏水稀释成浓度为1 000 μg／mL的母液，然后再分别稀释为0.1、1、5、10、50、100、500 μg／mL的系列浓度悬浮液，其中丙酮的含量为1％～2％。以蒸馏水作为空白对照。每个浓度重复3次。

1.2.2　病原菌的扩繁及保存

从太原市郊区各地区采集黄瓜霜霉病病样，收集孢子囊，转接至新鲜健康叶片以扩繁病原菌，并采用离体叶保存法保存菌株。

1.2.3　孢子囊悬浮液的配制

取病叶，以蒸馏水冲刷病斑，收集新鲜孢子囊，在显微镜下调整孢子囊含量5万～10万个／mL悬浮液(相当于10×10倍镜视野下20～30个孢子囊)，供在叶盘上进行生物测定。

1.2.4　测定方法

采用FAO推荐的叶盘漂浮法，测定黄瓜霜霉病菌对甲霜灵的敏感性以及抗药水平。

1.2.5　病情调查

根据病斑面积占叶盘面积的百分率划分病级：0级，无病；1级，1％～5％3级，5.1％～20％；5级，20.1％～50％；7级，50.1％～75％；9级，75％以上。

敏感基线：未用药地点采集的野生敏感菌株对供试药剂的平均EC₅₀；

抗药性菌株频率：对供试药剂产生抗药性菌株数／测试全部菌株数×100％；

抗性水平：供试菌株的EC₅₀／敏感菌株的EC₅₀。

1.2.6　抗性类型

根据抗性水平将不同的黄瓜霜霉病菌分为5个类型：敏感型s抗性水平<2倍；低抗型LR 2～10倍；中抗型MR 11～100倍；高抗型HR＞100倍；特高抗型SR＞1000倍。

2　结果与分析

2.1　菌株采集情况

本试验在太原市近远郊各地区黄瓜主要种植区进行广泛采样，并分离得到27个有代表性的黄瓜霜霉病菌株，其中小店区北格镇东蒲村7个、阳曲县黄寨村3个、小店区北格镇贾家寨村3个、小店区北格镇孙家寨村3个、清徐县高花镇尧城村3个、清徐县高花镇高华村4个、小店区北营农科院2个、榆次市乌金山镇王杜村2个。

2.2　不同地区黄瓜霜霉病菌对甲霜灵的抗性水平

本试验中黄瓜霜霉病菌对甲霜灵的敏感基线采用王文桥等测得的黄瓜霜霉病菌对甲霜灵的敏感基线：0.047 μg／mL。

太原近远郊各地区黄瓜霜霉病菌对甲霜灵普遍产生很高程度的抗性，所有供试菌株均可在含500 μg／mL药液培养皿中的叶盘上生长，抗性程度很高；如表1所示，太原近远郊地区采集的黄瓜霜霉病菌株对甲霜灵最高达到了6059倍，抗性水平范围27～6 059倍，平均抗性水平为1 490倍；除尧城村检测到2株中抗菌株外，其余黄瓜霜霉病菌株对甲霜灵的抗性水平均超过100倍，其中有12株高抗菌株，13株特高抗菌株。

2.3　不同地区黄瓜霜霉病菌对甲霜灵的抗性频率

所测的27个菌株均为抗性菌株(表1)，即各地方的黄瓜霜霉病菌对甲霜灵的抗性频率均为100％。在太原市近远郊各地区黄瓜霜霉病菌对甲霜灵已普遍产生抗性，导致在田间生产使用时防效大幅降低。

3　结果与讨论

太原市近远郊各地区均发现黄瓜霜霉病菌对甲霜灵的抗药性菌株，抗性频率均为100％；抗药性水平较高，除检测到2株中抗菌株外，其余菌株的抗性水平均超过100倍，其中12株为高抗菌株，13株为特高抗菌株。可见，黄瓜霜霉病菌的抗药性已成为太原市保护地蔬菜生产上的一个重要问题，开展黄瓜霜霉病菌对甲霜灵等苯基酰胺类杀菌剂的抗药性治理势在必行。

病原菌抗药性治理一般采用的治理策略有：①加强田间抗药性监测；②科学使用农药，减少甚至停用已产生抗药性的同类型药剂，寻求新的替代类型。合理进行杀菌剂的轮换和混配；③开展综合防治。该项工作是一项长期而艰巨的任务，主要表现在周期长、见效慢、需地区间统筹规划，值得进一步深入探讨。

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