益气温阳方联合化疗对结直肠癌晚期患者外周血Treg细胞影响研究

方案，参照《NCCN结肠癌临床实践指南》，选择FOLFOX或FOLFIRI方案的化疗，并根据患者一般情况调整化疗剂量。研究组在对照组基础上予以中药益气温阳方（药物组成：黄芪30 g，党参10 g，茯苓10 g，炙甘草10 g，炒白术10 g，薏苡仁30 g，制附子10 g，干姜6 g，仙灵脾10 g），并根据患者证型进行适当剂量调整;水煎服，分早晚2次服。21 d为1个治疗周期，每周期第8天开始服用中药，持续服用14 d，2组患者进行治疗2周期。

1.3.2  标本采集  第一周期治疗前以及第二周期21 d治疗后，清晨空腹使用肝素抗凝真空采血管采集外周静脉血2 mL，EDTA抗凝充分混匀确认无凝血，20℃～25℃室温保存，6 h内进行流式抗体染色。

1.3.3  指标检测  流式细胞术检测CD4+ CD25+CD127low/-细胞：使用直接免疫荧光标记法标记细胞并进行流式细胞仪分析。取100 uL全血，分别加入抗人 （FITC）-CD4+、 （APC）-CD25+、PE-CD127各5 uL，另设同型对照管，补偿管，涡旋震荡后，4℃避光孵育15 min，加入红细胞裂解液2 mL，涡旋后室温孵育15 min。以2 mL PBS1800 r/min离心洗涤5 min，弃上清，将细胞悬浮于0.5 mL PBS洗涤液中，振荡混匀后上机检测。设定淋巴细胞为Rl门内细胞，CD4+细胞为R2门内细胞，测定CD25+CDl27low/-细胞占CD4+细胞的百分比。

1.4  统计方法

应用SPSS 17.0 统计学软件，实验数据以均值x，标准差（x±s）表示，符合正态分布的数据两组间比较采用两独立样本t检验，非正态分布数据两组间比较采用两独立样本χ2检验，相关性分析采用Spearman 等级相关系数，P<0.05为差异有统计学意义。

2  结果

①对该研究中56例结直肠癌患者数据的统计分析显示，治疗后两组患者外周血CD4+ CD25+CD127low/-Treg细胞占CD4+细胞比率都存在部分患者上升、部分患者下降（上升9例，下降47例），总体Treg细胞比率较治疗前下降（P<0.05），图1。

②研究组与对照组患者在治疗前外周血CD4+ CD25+ CD127low/-Treg细胞比率差异无统计学意义（P>0.05）。对照组患者治疗后与治疗前Treg细胞比率未显示差异无统计学意义（P>0.05），研究组治疗后与治疗前Treg细胞比率差异有统计学意义（P<0.05）。研究组治疗后外周血CD4+ CD25+ CD127low/-Treg细胞比率低于对照组，差异有统计学意义（t=2.29，P=0.02）。

③研究组治疗后的Treg细胞比率较对照组下降明显，研究组Treg细胞的抑制率明显高于对照组，差异有统计学意义（P<0.01）。说明益气温阳方联合化疗对于结直肠癌患者Treg细胞的抑制程度高于单纯化疗。

3  讨论

肿瘤免疫治疗（cancer immunotherapy）是肿瘤学近年来最重要的研究方向[7]。针对肿瘤免疫逃逸机制的治疗在部分类型的肿瘤患者取得了长期缓解的疗效[8]。在免疫编辑的过程中，免疫逃逸是肿瘤形成的关键。免疫逃逸的机制包括肿瘤细胞的自身修饰、代谢和肿瘤微环境的两方面改变[9]。肿瘤微环境中存在大量包括调节性T细胞（Treg）在内的抑制性免疫细胞。Treg细胞能够分泌IL-10，TGF-β等因子抑制效应性T细胞及NKT等的增殖和功能，对于效应性T细胞抗肿瘤有抑制作用，在多种实体肿瘤的免疫逃逸中起重要的作用[10]。

中医认为结直肠癌病位在大肠，脾肾亏虚为本，邪毒瘀滞为标，二者互为因果，互相影响。化疗是广泛性细胞杀伤性的抗癌方法，结直肠癌化疗后患者表现出纳差消瘦、神疲乏力、畏寒腹泻、面色晦暗、舌淡暗苔白、脉沉迟无力等症状，处于“脾肾阳虚”的免疫抑制状态。

在“人是一个有机整体”的理论指导下，中医学认为分析病理机制时应首先着眼局部病变引起的整体反应。在结直肠癌化疗后，“脾肾阳虚”的机体整体状态为肿瘤提供了有利的生长、逃逸环境，循环肿瘤细胞、休眠细胞和微转移灶则成为肿瘤复发的种子。肿瘤微环境中发生的免疫逃逸正是肿瘤作用于机体、机体免疫对肿瘤的整体反应。因此，治疗时宜扶正培本，减轻化疗毒副反应，改善机体肿瘤内环境、及纠正机体肿瘤免疫功能抑制状态。化疗后联合益气温阳方治疗体现了中医扶正以抗癌的思想。

益气温阳方以黄芪四君子汤加四逆汤为主方。黄芪四君子汤益气健脾，四逆汤扶正温阳，联合薏苡仁健脾胜湿，仙灵脾温煦肾阳，共奏益气温阳之功。基础与临床研究[11-13]证实益气温阳类中药对于肿瘤免疫逃逸有调节作用。譚佳妮等[11]通过荷瘤小鼠试验，证实含有益气中药的消癌解毒方具有显著抑制结肠癌增殖的作用，其机制可能与减少外周血内Treg细胞的分布及肿瘤组织中 Foxp3 的表达进而影响其下游信号通路传导相关。周波等[12]通过对胃癌 IV期患者的临床研究发现参苓白术散能降低胃癌IV期患者外周血 CD4+CD25+Tregs[（28.87±8.54）%vs（10.12±4.32）%]。在该次研究中，两组结直肠癌患者外周血CD4+ CD25+ CD127low/-Treg细胞占CD4+细胞比率在治疗前后都存在部分患者上升、部分患者下降，总体Treg细胞比率较治疗前下降（P<0.05）。这说明Treg细胞检测在一定程度上能反应治疗效果。研究中选取研究组与对照组患者在治疗前外周血CD4+ CD25+ CD127low/-Treg细胞比率无明显统计学差异，而研究组治疗后的Treg细胞比率（4.28±1.23）%较对照组（5.03±1.21）%下降明显（P<0.05）;研究组Treg细胞的抑制率（0.22±0.17）显著高于对照组（0.09±0.13），有显著统计学意义（P<0.01）。说明益气温阳方联合化疗对于结直肠癌患者外周血CD4+ CD25+ CD127low/-Treg细胞的抑制程度高于单纯化疗。通过降低结直肠癌患者外周血Treg细胞水平，调节肿瘤免疫逃逸微环境来抑制肿瘤生长转移可能是益气温阳方扶正以抗癌的机制之一。临床运用益气温阳法联合化疗能够更好的提高患者的肿瘤免疫功能，提高其生存质量。因益气温阳法对肿瘤免疫逃逸的调节作用，将其与靶向治疗相结合以提高靶向药物疗效并作用于临床可能是未来的研究方向。

[参考文献]

[1]  Mittal D， Gubin MM， Schreiber RD， et al. New insights into cancer immunoediting and its three component phases-elimination， equilibrium and escape[J].Current Opinion in Immunology， 2014， 27（1）：16-25.

[2]  Parodi A， Traverso P， Kalli F， et al. Residual tumor micro-foci and overwhelming regulatory T lymphocyte infiltration are the causes of bladder cancer recurrence[J]. Oncotarget， 2016， 7（6）：6424-6435.

[3]  Olguín JE， Medina-Andrade I， Molina E， et al. Early and Partial Reduction in CD4+Foxp3+Regulatory T Cells during Colitis-Associated Colon Cancer Induces CD4+and CD8+T Cell Activation Inhibiting Tumorigenesis[J]. Journal of Cancer， 2018， 9（2）：239.

[4]  Wei T， Zhang J， Qin Y， et al. Increased expression of immunosuppressive molecules on intratumoral and circulating regulatory T cells in non-small-cell lung cancer patients[J]. American Journal of Cancer Research， 2015， 5（7）：2190.

[5]  钟锐，冯龙.CD4 + CD25 + CD127low/-调节性T细胞在晚期胃癌中的表达及意义[J].重庆医学，2016，45（15）：2065-2066.

[6]  Kond lková K， Vokurková D， Krejsek J， et al. Regulatory T cells （TREG） and their roles in immune system with respect to immunopathological disorders[J]. Acta Medica， 2010， 53（2）：73-77.

[7]  Couzin-Frankel J. Breakthrough of the year 2013. Cancer immunotherapy[J]. Science， 2013，342（6165）：1432-1433.

[8]  Yu Wang. Breakthrough and Obstacles of Clinical Cancer Immunotherapy[J].Medicine and Philosophy，2015，36（2B）：10-11.

[9]  Beatty GL， Gladney WL. Immune  escape  mechanisms as a guide for cancer immunotherapy[J]. Clin  Cancer Res， 2015， 21（4）： 687-692.

[10]  Wang J， Yang J. Identification of CD4+CD25+CD127- regulatory T cells and CD14+HLA-DRlow/- myeloid-derived suppressor cells and their roles in the prognosis of breast cancer[J]. Biomedical Reports， 2016， 5（2）：208.

[11]  谭佳妮， 石文静， 沈卫星，等. 消癌解毒方对结肠癌的抑制作用及对Treg细胞的影响[J].南京中医药大学学报， 2017， 33（5）：515-518.

[12]  Liu B， Guo PR， Sheng YW， et al. Effects of ganoderma lucidum polysaccharide on chemotherapy effect and immune escape in T24 bearing mice[J]. Cancer Research on Prevention and Treatment， 2015， 42（5）：459-465.

[13]  周波，戴飛跃.参苓白术散对胃癌IV 期患者外周血CD4+CD25+Tregs 的影响[J].湖南中医药大学学报，2015，35（5）：50-52.

（收稿日期：2019-01-21）

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