用蛋白质指纹技术预测局部晚期胰腺癌伽玛刀治疗疗效的研究报告

计划系统（treatment plan system， TPS），医生在增强CT图像上勾画靶区，通过图像处理后，输出治疗文件；（5）根据患者的状况、肿瘤靶区（grosstarget volume， GTV）、临床靶体积（clinical target volume， CTV）、计划靶体积（planning target volume， PTV）以及治疗目的来调整射线剂量具体分布及放射治疗方案。PTV应覆盖100%CTV，将等剂量曲线设定为60%，靶区相邻的十二指肠射线受量控制在15%～30%，超过5 cm的肿瘤单次周边照射剂量控制在2.5～3.5 Gy，不超过5 cm的肿瘤单次周边照射剂量控制在3.0～4.0 Gy；（6）分次剂量为300～400 cGy，次/周，治疗次数为8～12次，放射总剂量为3500～4500 cGy。

1.4 分析方法

1.4.1 疗效评价标准 评估近期疗效参照世界卫生组织实体瘤通用评价方法作为评价标准，共分为完全缓解（CR）、部分缓解（PR）、稳定（SD）以及进展（PD）。通常以CR、PR为有效。完全缓解为肿瘤完全消退至少4周以上，无新的病灶出现；部分缓解为肿瘤消退≥50%，至少维持4周且无新的病灶出现；稳定为肿瘤消退<50%或增大<25%；病变进展0为肿瘤增大≥25%或出现新的病灶。疗效于伽玛刀治疗后2个月评定。

1.4.2 分组方法 根据WHO实体肿瘤疗效评价标准将伽玛刀治疗后2个月的患者分成治疗有效组（CR+PR）和治疗无效组（SD+PD）。

1.5 统计学处理 使用Biomarker Wizard 3.1软件统一进行分析，通过比较有效组和无效组血清蛋白质指纹图谱数据，寻找两组表达差异性的蛋白质峰，通过此软件进行分析、计算，进行比较二组中相同质荷比的蛋白质含量（丰度）的P值，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

通过比较有效组和无效组血清特异性蛋白质质谱图，共检测出56个蛋白质峰，经过Biomarker Wizard 3.1软件分析，其中M/Z为3337、9234、11 650的蛋白质组指纹（丰度）差异有统计学意义（P<0.05），其中无效组上调的峰M/Z为3337、11 650，下调的峰M/Z为9234。见表1。用SELDI技术描述35例患者的蛋白质组指纹见图1。

3 讨论

近年来，我国胰腺癌的治疗水平有了长足的进步，但其整体疗效仍不令人满意，尤其对晚期胰腺癌无有效治疗手段。目前正寻找更加有效治疗手段及新路径。伽玛刀治疗因其精度高，照射范围小，正常组织受照剂量低等优点，通常为副作用相对小、近期疗效较好，且能快速缓解症状，在胰腺癌的放射治疗中独树一帜，是治疗胰腺癌可行手段[7-9]。有临床研究证实，对早期局限期病灶，其治疗效果可与手术相当[10]，但笔者在临床中也发现，也有部分患者经伽玛刀治疗后，效果差，如果寻找一种监测手段，能够提前预知伽玛刀治疗的疗效，就能有选择性应用该方案进行胰腺癌的治疗，提高治疗效果，使患者受益。

伽玛刀作用机理是通过伽玛刀射线照射，使病变组织细胞的RNA或DNA链断裂，破坏某些辅酶或生物酶，影响线粒体能量系统，进而发生病灶组织坏死、液化、吸收，取得治疗目的[11]。既往研究也证实，细胞受到电离辐射后，通过对DNA损伤，最终的导致DNA双链断裂，其中包括直接及间接作用。肿瘤细胞抵抗射线杀伤的主要机制之一为DNA损伤修复（DNA DamageRepair， DDR），如果细胞的DDR系统受到了损害影响，其放射敏感性会明显增加，目前研究也证实，通过监测DNA损伤指标γ-H2AX蛋白表达水平及DNA损伤修复指p-ATM、Ku80、Rad51等蛋白的表达水平的变化，可以直接了解射线的照射效果[12-13]。目前对放疗耐受的机理研究相对少，笔者推测与各种细胞因子及多种未知蛋白质参与的多种通路有关，且与恶性肿瘤的多变异特性和异质体特性也有明显关系。

SELDI-TOF-MS技术，简称为SELDI技术，即表面增强激光解析离子飞行时间（time of flight）质谱技术，是近年来发展起来的新的生物检测技术，该技术利用蛋白质芯片技术进行研究，成为研究蛋白质的有效平台。由于该技术可以同时检测大量未知蛋白质的，通过检测软件进行分析可得出特异性蛋白的质荷比。然后直接对其进行定性、定量分析，可以使指纹图准确描述和量化[14]。因而，通过该技术可以发现一些特异性蛋白，应用疾病早期诊断及治疗疗效监测，目前已经广泛应用于人体尿液、血清等体液的测定[15]，本研究工作以此为理论指导，通过检测伽玛刀治疗的胰腺癌患者血清，描述其蛋白质组指纹，利用Biomarker Wizard软件分析伽玛刀治疗后有效组和无效组之间有显著差异的蛋白指纹。

通过利用蛋白质芯片的大规模的检测，可以从胰腺癌治疗患者的血清中找到微量差异蛋白质的变化，利用这一组蛋白质组成的血清蛋白质谱图的特征变化，为寻找性提供了有效的线索。既往应用蛋白指纹技术通过对肺癌、胃癌、肠癌等对化疗耐药性研究，取得很好预测效果，裴毅等[16-17]界定了SELDI指纹中M/Z8693的丰度与疗效预测有关并得出的SELDI指纹M/Z8693，丰度15%的肺腺癌患者为服用吉非替尼治疗优势人群，在随后的研究中也得到进一步证实，目前已应用于临床。本研究共选择35例患者，其中伽玛刀治疗有效者23例，无效者12例，在捕获的56个蛋白质中，大部分无差异，其中仅有3个差异蛋白质峰。本研究检测到M/Z为3337、9234、11 650的蛋白质组指纹（丰度）在有效组和无效组之间比较，差异有统计学意义，说明这3种蛋白质对胰腺癌治疗效果有着更加重要的意义，同时提示在胰腺癌治疗患者中发生3种蛋白质的特征性改变。本研究证实无效组上调的峰M/Z为3337、11 650，下调的峰M/Z为9234，在下一步临床工作中，以此研究作为平台进行大样本临床验证工作，进一步确定其预测疗效的指标，更好有针对性地进行有效治疗。

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（收稿日期：2015-09-02）

（本文编辑：王宇）

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