两种方法测定花生中黄曲霉毒素之比较

摘要：比较了两种测定花生中黄曲霉毒素(AFT)的方法—高效液相色谱(HPLC)法和荧光光度计法。以60%甲醇提取样品中(AFT)，经免疫亲和柱净化,洗脱后,分别以高效液相色谱和荧光光度计检测。结果证明，这两个检测方法的精密度回收率都高，检出限均能够满足欧盟针对花生中最新限量AFT的要求，二者结果一致。

关键词：黄曲霉毒素；花生；免疫亲和柱；高效液相色谱；荧光光度计

中图分类号：Q93-33 文献标识码：A 文章编号：1674-0432（2011）-08-0062-1

1实验操作步骤

1.1 样品的提取

秤25.0g花生粉碎样品放入250ml的锥形瓶中，加入125ml提取液和5g氯化钠，采用均质器快速搅拌1min。采用定量滤纸进行过滤，采集滤液20.0ml放入50ml量筒中用20.0ml水稀释。采用玻璃纤维滤纸进行过滤等澄清后进行免疫亲和柱净化操作[1]。

1.2 免疫亲和柱净化

将免疫亲和柱连接在10ml玻璃针筒下面，在移取10ml的1g样本的澄清滤液注入玻璃针筒里，在连接空气压力泵，使溶液以6ml/min的流动速通过免疫亲和柱，使2-3ml空气通过柱体，使用1.0ml甲醇1-2ml/min流速进行洗脱，收集所有洗脱液放入玻璃测试管中。

1.3 检测

1.3.1 荧光光度计测定

1.3.1.1 显色液的添加 用移液管移分别移取1.0ml显色剂（0.002%溴水溶液）与测试管的洗脱液中，（开口的溴水溶液使用期限为8小时）[2]。

1.3.1.2 混匀 将1.0ml显色剂加到测试管的洗脱液中后。用微型振荡器混匀后静置后进行测定。

1.3.1.3 测定 用擦镜纸将测试管擦净以保证其无荧光性，然后将测试管置于已标定好的荧光计中。60sec后,读取样液中黄曲霉毒素（B1+B2+GI+G2）的浓度（PPB）。

1.3.2 HPLC检测

1.3.2.1 色谱条件 内径15cm×4.6mm色谱柱，直径5μm填料，Lichrocartc18柱，柱温：28℃室温；湿度：45%室内湿度；流动相：甲醇-乙氰-水(30+30+50,V+V+V) ；1ml/min流速，440nm的6荧光检测器发射波长、360nm激发波长；20uL进样量；采用外标法计算。

1.3.2.2 结果计算 将进样瓶按标号次序放入自动进样盘中，由色谱工作站直接测出结果标准谱图见图1。

HPLC检测结果用HP化学工作站进行数据处理。结果计算与表达用色谱处理机直接得出结果。

2 数据结果

因荧光计法只能测出黄曲霉毒素总量，所以采取与无毒素样品中添加AFTB1，然后分别用两种方法检测，进行二者的精密度和回收率的比较，基底是空白样品，分别采用1、2、4μg/kg水平的回收率进行实验，进行5次每水平的平行实验见表1。

由图1可得，添加值分别为1、2、4ppb时，HPLC法的检测结果和荧光光度计法检测结果非常相似，系数r=0.936（P<0.05）。

3 结论

结果证明，两个检测方法的精密度回收率都高，检出限均能够满足欧盟针对花生中最新限量AFT的要求，二者结果一致（r=0.936）。

二者区别为HPLC方法精密度和准确度高于光度计法，HPLC方法检出限比光度计法低，自动化程度高可以连续处理大量样品，适合科研型实验室和需要大量样品检测实验室。HPLC造价高，要求高的操作技术不易大面积推广，有机试剂消耗多在实验中对环境造成污染；荧光光度计法读数高于实际值，可达到定量分析与筛选阳性样品目的，测试时不用配制毒素，消耗有机试剂少，这属于荧光光度计法的优点。

参考文献

[1] 张艺兵,张鹏等.现代商检科技,1999,9(6):5.

[2] 鲁长豪.食品理化检验学.北京:人民卫生出版社,1988,

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作者简介：李卫丽（1982-），女，临沂市技术学院助理讲师。

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