基于光谱法的清脑复神液指纹图谱研究

材料

UV-2300型紫外可见分光光度计（上海美谱达仪器有限公司）；PE spectrum 2红外光谱仪（天津博天胜达科技发展有限公司）；FW-5压片机（天津博天胜达科技发展有限公司）；玛瑙研钵；溴化钾（光谱纯，天津市光复精细化工研究所）。

清脑复神液20批，均来自四川中方制药有限公司。本课题前期对其盐酸小檗碱及总黄酮含量进行了测定，并规定了限度。其中16批样品符合规定（批号为131117，131118，131121，131122，131123，131124，131126，131128，131129，131152，140337，140338，14（1339，140341，140342，140344，其中131117，131126，131252，140337含量较高），4批样品不符合规定（批号为140340，140343，140345，140346）。

2方法与结果

2.1紫外指纹图谱

2.1.1测试条件

以15%的乙醇调整基线并作为参比液进行紫外光谱测定，设定扫描波长为200～900 nm，扫描速度200nm/min，狭缝宽1.5nm，采样间隔1nm，自动切换波长340nm。

2.1.2精密度试验

同一批清脑复神液（批号：140337），取1份按照“2.1.1”项下的测试条件连续测定6次，所得紫外谱线在298，338，465，550，650nm处吸光度的RSD%分别为1.76%，0.69%，0.39%，1.93%，1.88%，均<3%，表明仪器精密度良好。

2.1.3稳定性试验

取同一清脑复神液（批号：140337）按照“2.1.1”项下的测试条件，每隔1h测定1次，结果5h内所得紫外谱线在298，338，465，550，650 nm处吸光度的RSD%分别为1.74%，0.66%，1.73%，1.55%，1.93%，均<3%，表明样品在5 h内稳定性良好。

2.1.4重复性试验

同一批清脑复神液（批号：140337），取6份按照“2.1.1”项下的测试条件测定，所得紫外谱线在298，338，465，550，650 nm处吸光度的RSD%分别为1.98%，0.92%，1.82%，1.56%，1.67%，均<3%，表明该方法重复性良好。

2.1.5清脑复神液紫外光谱采集

取20批清脑复神液样品，按照“2.1.1”项下的测试条件分别测定，其紫外光谱叠加图如图1所示。

2.1.6对照紫外指纹图谱的建立

在进行相似度分析之前，先建立清脑复神液的对照紫外指纹图谱，选择在前期研究中含量符合规定的10批样品（批号为：131117，131118，131121，131122，131123，131124，131126，131128，131129，131252），以其吸收强度的平均值为对照指纹图谱的吸收强度，最终得到的紫外图谱如图2所示。

2.1.7样品指纹图谱相似度分析

将清脑复神液样品的紫外图谱与得到的对照紫外指纹图谱进行相似度分析，采用相关系数法进行计算，结果见表1。可以看出，采用相关系数法计算的相似度大小与样品的质量状况密切相关。前期研究中，含量符合规定的样品，其紫外图谱与对照图谱的相似度均在0.995以上，且含量较高的4批样品，其相似度均在0.999以上，而含量不符合规定的4批样品，则其相似度<0.993。

2.2红外指纹图谱

2.2.1测试条件

用胶头滴管取清脑复神液样品一滴于玛瑙研钵中，挥干，加入0.3 g溴化钾，研磨均匀，取适量研细后的粉末平铺于红外压片模具中，以15 MPa压力压制2 min，将制备好的样片置于红外光谱仪中测定红外光谱，测定区域为450～4000em-1。

2.2.2精密度试验

同一批清脑复神液（批号：140338），取1份按照“2.2.1”项下的方法制备并连续测定6次，所得红外谱线在3 392，2 391，1 646，1 394，1 054 cm^-1处透光率的RSD分别为2.06%，1.99%，1.45%，1.98%，2.38%，均<3%，表明仪器精密度良好。

2.2.3稳定性试验

取同一清脑复神液（批号：140338）按照“2.2.1”项下方法制得供试片，放入干燥器内保存，每隔1 h测定1次，结果5h内所得红外谱线在3 392，2 391，1 646，1 394，1 054 cm^-1处透光率的RSD分别为1.76%，2.41%，2.05%，1.78%，1.68%，均<3%，表明样品在5h内稳定性良好。

2.2.4重复性试验

同一批清脑复神液（批号：140338），取6份并分别按照“2.2.1”项下的方法压片后测定，所得红外谱线在3 392，2 391，1 646，1 394，1 054 cm^-1处透光率的RSD分别为2.36%，2.01%，1.65%，1.58%，1.98%，均<3%，表明该方法重复性良好。

2.2.5清脑复神液红外光谱采集

取20批清脑复神液样品，按照“2.2.1”项下方法制备并分别测定，其红外光谱叠加图如图3所示。

2.2.6对照红外指纹图谱的建立

在进行相似度分析之前，先建立清脑复神液的对照红外指纹图谱，选择在前期研究中含量测定符合规定的10批样品（批号为：131117，131118，131121，131122，131123，131124，131126，131128，131129，131252），以其吸收强度的平均值为对照指纹图谱的吸收强度，最终得到的红外图谱如图4所示。

2.2.7样品指纹图谱相似度分析

将清脑复神液样品的红外图谱与得到的对照红外指纹图谱进行相似度分析，采用相关系数法进行计算，结果见表2。前期研究中，含量符合规定的样品，其红外图谱与对照图谱的相似度均在0.990以上，且含量较高的4批样品，其相似度均在0.998以上：而含量不符合规定的4批样品，其相似度则<0.980，与紫外指纹图谱相似度分析结果一致。

3结束语

中药指纹图谱是基于对中药物质群整体作用的认识，可以较充分地反映出中药复杂混合体系中各种化学成分分布的整体状况，已广泛应用于中药的质量评价。目前建立中药指纹图谱的方法主要有紫外光谱法、红外光谱法、核磁共振、法、液相色谱法、气相色谱法、毛细管电泳法等。

紫外光谱可反映出中药中化学组分π→π^*、n→π^*及n→σ^*等化学键信息，由于不同的中药体系紫外吸收曲线具有不同指纹特征，故紫外光谱指纹图谱可用于中药及其制剂的质量鉴别。本试验将清脑复神液样品的紫外图谱与得到的对照紫外指纹图谱进行相似度分析，结果显示，在前期研究中，含量符合规定的样品，其紫外图谱与对照图谱的相似度均在0.995以上，且含量较高的4批样品，其相似度均在0.999以上，而含量不符合规定的4批样品，其相似度则<0.993。可见采用紫外指纹图谱对清脑复神液进行分析，其结果可以反映出样品的质量状况，因此可应用紫外指纹图谱对清脑复神液质量进行评价。

中药红外光谱可看作是多个纯物质的叠加，不同的中药都有独特的红外光谱特征，因此红外光谱在中药中有较高的鉴别价值，只要复方中药的质和量上保持相对稳定，红外光谱就有一定的客观性和可重复性。本试验将清脑复神液样品的红外图谱与得到的对照红外指纹图谱进行相似度分析，结果，在前期研究中，含量符合规定的样品，其红外图谱与对照图谱的相似度均在0.990以上，且含量较高的4批样品，其相似度均在0.998以上，而含量不符合规定的4批样品，其相似度则<0.980，与紫外指纹图谱相似度分析结果一致。因此可采用红外指纹图谱对清脑复神液的质量进行评价。

本研究中，尽管20批清脑复神液的紫外及红外指纹图谱的相似度均在0.9以上，且都比较相近，然而在前期研究中含量不符合规定的4批样品与符合规定的样品还是有较明显的差别，这可能与生产中原药材的质量以及投料中缺药有关，因此采用紫外及红外指纹图谱对清脑复神液的质量控制具有一定的意义。

（编辑：莫婕）

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