不同干燥方式对瑞香狼毒总黄酮提取及抑菌活性的影响

材料发脆，因材料处理方式不同，导致黄酮类化合物的提取率也存在较大的差异。本研究旨在通过比较不同的干燥方式对瑞香狼毒总黄酮含量及抑菌活性的影响，筛选出一种合适的材料前处理方法，为提高总黄酮类化合物的提取效率提供理论指导。

1 材料与方法

1.1 材料与仪器

1.1.1 材料与试剂。瑞香狼毒：安徽省亳州市珍益堂中药材有限公司；乙醇、亚硝酸钠和硝酸铝：分析纯，襄阳市盈达化工仪器有限公司。

1.1.2 仪器。紫外可见分光光度计：UV-2550型，日本岛津公司；红外水分快速测定仪：MS-70型，日本AND公司；电热干燥箱：上海博迅，GZX-9246MBE；中药切片机：永历DYQ888，瑞安市永历制药机械有限公司。

1.2 方法

1.2.1 瑞香狼毒根的烘干处理。将瑞香狼毒根在中药切片机上切成3 mm的切片，分别在电热鼓风干燥箱、红外水分快速测定仪及微波炉内烘干至恒重（其中电热鼓风干燥箱和红外水分快速测定仪的温度均设定为60 ℃），粉碎后，过60目筛，备用。

1.2.2 总黄酮类化合物的提取及含量测定。准确称取烘干至恒重的瑞香狼毒粉末样品100 g装入索氏提取器，依次加入石油醚和95 %乙醇各200 mL，分别回流24 h，减压浓缩得浸膏。取浸膏5 g，加入蒸馏水50 mL，在60 ℃水浴条件下加热2 h，冷却至室温，过滤后弃滤液，重复3次，溶剂挥干后得到总黄酮类化合物。

标准曲线的制作：精确称取烘干至恒重的芦丁标准品15 mg，用30 %乙醇溶解并定容至100 mL，浓度为0.15 mg/mL。准确移取标准溶液0、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0 mL，分别置于10 mL容量瓶中，分别加入5 % NaNO2溶液0.3 mL，摇匀后静置5 min。再加入10 % Al（NO3）3溶液0.3 mL，摇匀后静置6 min。加入1.0 mol/L NaOH溶液2 mL，用30%乙醇定容至刻度，混匀后静置15 min，于510 nm处测定吸光度，以零管为空白对照，以芦丁含量为横坐标，以吸光度为纵坐标绘制标准曲线。

样品的测定：称取待测样品5 mg，用30%乙醇定容定容至10 mL，取适宜体积的待测溶液，加入5 % NaNO2溶液0.3 mL，摇匀后静置5 min。再加入10% Al（NO3）3溶液0.3 mL，摇匀后静置6 min。加入1.0 mol/L NaOH溶液2 mL，用30%乙醇定容至10 mL，混匀后静置15 min，于510 nm处测定吸光度，根据标准曲线求出样品中总黄酮类化合物的含量。

1.2.3 总黄酮类化合物抑菌活性测定。瑞香狼毒总黄酮类化合物的抑菌活性测定采用抑菌圈法[14]。供试菌株为大肠杆菌（Escherichia coli.）、金黄色葡萄球菌（Staphyloccocus aureus）、蜡状芽孢杆菌（Bacillus cereus. Frankland）和枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）。

1.3 数据处理

所得数据用Excel 2003软件计算平均值和标准差，用Origin 8.0软件作图，并用SPSS 17.0分析不同处理之间的差异显著性（P<0.05）。

2 结果与分析

2.1 芦丁标准曲线

用芦丁做标准品绘制的标准曲线如图1所示，通过最小二乘法作线性回归可得方程：y=1.116 9x+0.028 8，R2=0.995 1。从图中可以看出，在0～0.6 mg范围内，溶液的吸光值与芦丁含量线性关系良好。

2.2 不同干燥方式对瑞香狼毒黄酮类化合物含量的影响

不同的干燥方式对瑞香狼毒黄酮类化合物含量的影响结果见图2，从图中可知，黄酮类化合物的含量在烘干、红外干燥和微波干燥条件下有显著差异，其中通过红外干燥处理提取的黄酮类化合物含量最高，为17.76 mg/g，烘干处理方式得到的黄酮类化合物低于红外干燥处理方式，为13.98 mg/g，而通过微波干燥方式前处理提取的黄酮类化合物含量最低，仅为11.17 mg/g。

2.3 不同干燥方式对瑞香狼毒黄酮类化合物抑菌活性的影响

不同的干燥方式对瑞香狼毒黄酮类化合物抑菌活性的影响可通过测定纸片周围形成的透明的抑菌圈直径获得，抑菌圈直径越大，表明药物对病原菌的抑制作用越强。从表1可以看出，不同干燥方式处理后提取的黄酮类化合物对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌均有抑制作用，对金黄色葡萄球菌的抑制效果强于大肠杆菌。3种干燥方式中，红外干燥处理后提取的黄酮类化合物对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的抑制效果强于其他2种方式，可能与红外干燥处理后得到的黄酮类化合物含量较高有关。而通过3种干燥方式提取的黄酮类化合物对蜡状芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌的抑制作用在本试验中未检测出。

3 结论与讨论

药材的干燥方式对药材的品质有着重要的影响。本研究表明，因干燥方式不同，导致瑞香狼毒根中黄酮类化合物的含量存在较大的差异。通过红外干燥处理提取的黄酮类化合物含量最高，烘干处理次之，而通过微波干燥方式前处理提取的黄酮类化合物含量最低。本试验采用的红外干燥法是用直管卤素灯和独特设计的SRA（二次辐射辅助装置）辐射器来加热物料，经过预设时间逐步升温到设定温度，干燥速度快，而且提取的黄酮类化合物含量高，说明该干燥方式兼具保质特点。而药材在烘干方式处理下需2 d左右才达到恒重，速度慢且消耗能量，微波干燥虽然速度快，但温度较难控制，对药材品质的影响较大。以往研究表明，瑞香狼毒对人体常见病原细菌和真菌有较强的抑制作用[15-16]。因药材前处理方式不同，导致提取的化合物对病原菌的抑制效应产生差异，红外干燥处理后提取的黄酮类化合物对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的抑制效果强于其他2种方式，可能与红外干燥处理后得到的黄酮类化合物含量较高有关。

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