细菌性草鱼白头白嘴病病原的分离与鉴定

材料与方法

1.1 试验材料

病鱼采自丹东东港某养殖场。普通琼脂平板及鲜血培养基自制。培养基配制及生化试验所用药品均为分析纯，购自北京康润生物有限公司。

1.2 病原分离

将具有典型症状的病鱼，用灭菌生理盐水冲洗体表后，对体表及病灶用75%酒精消毒，用接种环取其病灶及肝、脾、肾划线接种于普通琼脂培养基上，挑选优势菌落进行纯化培养。

1.3 病原菌形态的观察及细菌学检查

将纯化的细菌置于培养皿内25℃培养24小时，观察其生长状况、菌落形态及其溶血特性等，并采用革兰氏染色，在显微镜下观察。

1.4 生化试验

将培养的菌落分别接种到含有各种鉴定试剂的生化试验微量鉴定管中，并进行相关生化试验。试验项目有明胶液化、葡萄糖、淀粉、酪氨酸脱羧酶、分解纤维素、还原硝酸盐、吸收拘橼酸盐、吲哚试验、硫化氢试验、分解几丁质、分解七叶灵、过氧化氢酶试验、分解酪素、溶解死细菌。接种到上述各生化试验微量鉴定管后，置于25℃培养2～3天观察结果。

1.5 回感试验

将分离到的草鱼白头白嘴病疑似菌株制成2×109菌落形成单位/毫升菌悬液；将制成的菌悬液及生理盐水按0.2毫升/尾，注射到试验组及对照组草鱼背鳍下方的背部肌肉中。将试验组草鱼与对照组草鱼隔离饲养，正常投喂饲料，连续观察5天，对发病草鱼情况进行记录并对其进行解剖检查、病原菌分离。

2 结果与分析

2.1 病原分离与纯化

通过病原菌的分离与纯化，得到菌株BZ-1410，在普通琼脂培养基上培养发现菌落较小，呈圆形且表面光滑，呈半透明的露珠状；在鲜血琼脂培养基上培养发现菌落生长茂盛，呈乳白色、半透明、圆形，表面突起较明显，周围形成1毫米左右的溶血环。

2.2 生化试验鉴定

菌株BZ-1410，革兰氏染色阴性。生化试验结果见表1，结果表明菌株BTBZ-1410为一种黏细菌（Myxococcus）。

2.3 回感试验结果

将菌株BTBZ-1410接种试验草鱼，试验组草鱼在8小时后开始发病，病鱼自吻端至眼球的一段皮肤溃烂，口张闭失灵而造成呼吸困难，表现白头白嘴症状。病鱼表现精神沉郁，反应迟钝，离群独游。随着病程发展，病变逐渐加重，病鱼不仅是眼、鳃、口腔、体表等部的表皮组织出现白色絮状物，个别病鱼的颅顶和眼部周边表现充血、肿胀的现象而呈现“红头白嘴”症状，与临床症状相符。分离病鱼病原菌并进行生化试验检测，其结果与表1相符。

结果表明，黏细菌（Myxococcus）为草鱼白头白嘴病的病原菌。

3 讨论

草鱼白头白嘴病是我国比较常见的疾病，该病对于夏花草鱼影响非常严重，这主要是因为夏花草鱼个体处在发育期间，免疫系统发育不完全，由于白头白嘴病是通过表皮侵染的途径对草鱼进行感染，而这个时期的鱼苗体表容易受伤，因此幼鱼较易感病。目前，由于水产养殖业的发展，草鱼饲养规模和养殖密度急剧扩大，一些养殖厂采取混养的饲养方法，养殖厂种鱼的育苗相对集中且育种的规模较大，使现在的草鱼白头白嘴病常随种鱼和鱼苗传播，不易根除，且经常与其他病症并发，导致病理特征不典型，对疾病的及时发现和鉴定造成了影响。

目前，对草鱼白头白嘴病的防治方法主要使用生石灰、漂白粉等消毒药物对鱼塘进行投放前消毒及饲养过程中的定期泼洒。中草药虽然相对环保，减少药残，但其应用效果不及消毒药显著，实际养殖过程中就增加了草鱼患病的风险。对疾病防治最理想的措施是通过疫苗预防，本文对草鱼白头白嘴病的病原进行了分离鉴定，在此基础上如果能进一步研究，将白头白嘴病的疫苗研究成功并应用于生产，该病将不再会是草鱼养殖过程中的威胁。

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